耐熱DNA聚合酶簡(jiǎn)介
合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個(gè)關(guān)鍵因素，如何選擇最合適的耐熱DNA聚合酶，是用戶首先考慮的問題。目前市面上有多種DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區(qū)別在于特異性、保真性、耐熱性、擴(kuò)增速率、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度等幾個(gè)指標(biāo)。
我公司生產(chǎn)的5種耐熱DNA聚合酶全部采用國外生產(chǎn)工藝和質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)；是經(jīng)過多次分子篩，離子交換層析柱純化的，去除了宿主DNA和蛋白酶等雜質(zhì)的超純型產(chǎn)品。特異性非常好，且特別穩(wěn)定。經(jīng)檢測(cè)，室溫放置1個(gè)月，活性不發(fā)生改變。
Taq | 擴(kuò)增效率最高的耐熱DNA聚合酶，能很好地?cái)U(kuò)增6kb以下的DNA片段。 |
Pfu | 目前保真度最高的耐熱DNA聚合酶，但擴(kuò)增效率低于Taq酶，能很好的擴(kuò)增2kb以下的片段。一般用于點(diǎn)突變，基因篩選等對(duì)保真性要求很高的DNA擴(kuò)增。 |
Taq Plus | 集高效擴(kuò)增和高保真度于一體，能有效地?cái)U(kuò)增10kb以下的片段，擴(kuò)增效率比Pfu高，保真度比Taq酶好，對(duì)于有些結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板，如GC含量高，有二級(jí)結(jié)構(gòu)等可選用Taq Plus擴(kuò)增。 |
HotStart | 采用了創(chuàng)新的合成親和性配體技術(shù)，該配體可以以一種溫度依賴性的方式，可逆性地阻斷酶的活性。能最大限度的減少PCR擴(kuò)增全過程中的非特異性擴(kuò)增，大大提高了PCR反應(yīng)的特異性。能很好地?cái)U(kuò)增6kb以下的DNA片段，PCR產(chǎn)物 3＇端加A，可直接用于TA載體克隆。 |
Long Taq | 具有3＇到5＇外切酶活性的耐熱DNA聚合酶，它不但擴(kuò)增效率高而且錯(cuò)配率低，對(duì)簡(jiǎn)單模板可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)40kb的片段，對(duì)復(fù)雜模板也可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)15kb的片段，特別適合于長(zhǎng)片段的擴(kuò)增，如構(gòu)建基因圖譜及分子遺傳學(xué)研究等。 |
耐熱DNA聚合酶長(zhǎng)度、擴(kuò)增效率和保真度比較
| 項(xiàng)目 | Pfu | HotStart Taq | Taq | Taq Plus | Long Taq |
DNA | 良好地?cái)U(kuò)增 | ＜3kb | ＜8kb | ＜8kb | ＜20kb | ＜25kb |
可能擴(kuò)增 | ＜5kb | ＜12kb | ＜12kb | ＜30kb | ＜40kb | |
Genomic DNA | 良好的擴(kuò)增 | ＜2kb | ＜6kb | ＜6kb | ＜10kb | ＜20kb |
可能擴(kuò)增 | ＜4kb | ＜8kb | ＜8kb | ＜20kb | ＜40kb | |
| 擴(kuò)增效率 | + | +++ | ++++ | +++ | ++++ |
保真度比較 | 10 | 1 | 1 | 5 | 3 |
注： 將Pfu酶的保真度設(shè)置為10
